1、收集：用18號穿刺器穿刺術(shù)，20ml注射器（含有肝素2000u）在髂前上棘抽取骨髓10ml。抽取骨髓時(shí)留意維持針管斜坡在骨髓內?？焖俪槿」撬璨⑹蛊浜透嗡貏蚍Q(chēng)，避免造成血塊。

2、分離純化：經(jīng)1200rpm離心10min，吸除頂層脂肪細胞，清洗三次。在骨髓中引入相對密度為1.073Percoll分離出來(lái)液。室內溫度下3000g離心30min，有核細胞在分頁(yè)面及頂層液態(tài)中，紅細胞絕大多數在沉積中。用二倍容積的PBS稀釋液，并再度離心。將細胞重懸在少糖10%DMEM FBS細胞培養液中。調節細胞相對密度為1.6*106個(gè)/cm2注射于塑造瓶中。37℃，摩爾分數為5%的CO2恒溫培養箱中塑造，72d后棄去未貼壁細胞，之后每3天換液一次。當細胞匯聚90%單面細胞后，0.25%蛋白酶室內溫度消化吸收傳代培養，離心（1000rpm，10min），棄上清，沉積按1：1占比傳代培養。

3、儲存：搜集生長(cháng)發(fā)育優(yōu)良的細胞，取小量細胞混液（約0.1ml）記數細胞濃度值及凍前成活率。將細胞添加到含10%DMSO和30%血清蛋白的新鮮培養液中，用無(wú)菌檢測塑膠冷藏儲存管放進(jìn)到程序流程減溫盒中，于-70℃經(jīng)24h后轉到液態(tài)氮儲存。30d后，恢復細胞，用椎蟲(chóng)藍上色檢驗細胞活力，于37℃、摩爾分數為5%的CO2恒溫箱中塑造，每日顛倒顯微鏡下觀(guān)查細胞生長(cháng)發(fā)育狀況（細胞生長(cháng)發(fā)育情況及總數）。關(guān)鍵觀(guān)查指標值：1）人骨髓間充質(zhì)干細胞的生長(cháng)曲線(xiàn)圖剖析；2）細胞制冷機組恢復生長(cháng)發(fā)育特點(diǎn)剖析。